群勃龍，常被作為動(dòng)物生長促劑用于動(dòng)物養(yǎng)殖。但群勃龍會(huì)以原形或中間代謝產(chǎn)物在動(dòng)物的細(xì)胞、組織或器官中蓄積，造成殘留。一旦被人食用后，可產(chǎn)生一系列激素樣作用，如破壞人機(jī)體的激素平衡、干擾人的內(nèi)分泌功能、影響生育能力、并具有潛在致癌性、發(fā)育毒性。2020年，群勃龍已被列入食品動(dòng)物中禁止使用的藥品及其他化合物清單。但因其很強(qiáng)的促蛋白合成作用，少數(shù)生產(chǎn)企業(yè)及飼養(yǎng)者、經(jīng)營者會(huì)在牛養(yǎng)殖過程中濫用或非法使用作為同化激素類添加劑的群勃龍以促進(jìn)牛的生長和牛奶生產(chǎn)，常常造成群勃龍?jiān)谂Ｈ狻⑴Ｄ痰葎?dòng)物性源食品中殘留量超標(biāo)，危害人體健康。因此，對(duì)食品中群勃龍殘留的檢測(cè)至關(guān)重要。然而群勃龍殘留檢測(cè)樣品基質(zhì)復(fù)雜、干擾物質(zhì)多、濃度低，對(duì)方法的靈敏度、準(zhǔn)確度、特異性等要求極高。液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜優(yōu)秀的靈敏度、準(zhǔn)確度可以滿足檢測(cè)需求，能夠在高背景或干擾物存在的情況下完成對(duì)群勃龍定量檢測(cè)。因此，本文參考《GB 31658.14-2021 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 動(dòng)物性食品中α-群勃龍和β-群勃龍殘留量的測(cè)定 液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法》，建立了測(cè)定牛奶中群勃龍類獸藥含量的快速且高靈敏度的檢測(cè)方法。
關(guān)鍵詞：LC-MS/MS、食品、牛奶、α-群勃龍、β-群勃龍、獸殘、GB 31658.14-2021
實(shí)驗(yàn)部分
儀器
表1 液相色譜串聯(lián)三重四級(jí)桿質(zhì)譜儀
表2 液相色譜串聯(lián)三重四級(jí)桿質(zhì)譜儀檢測(cè)參數(shù)
試劑及標(biāo)準(zhǔn)品
試劑：質(zhì)譜級(jí)甲酸(CNW)、質(zhì)譜級(jí)乙酸銨（CNW）、色譜級(jí)甲醇（Merck）、色譜純叔丁基甲醚（CNW）、色譜純乙腈（Merck）；乙酸鈉、乙酸、氨水（國藥集團(tuán)）、β-葡萄糖醛酸酶/芳香基硫酸酯酶溶液（CNW）；
純水：18.2 MΩ·cm去離子水（25℃）；
標(biāo)準(zhǔn)品：α-群勃龍、β-群勃龍（壇墨質(zhì)檢）。
樣品前處理
樣品前處理方法：參考《GB 31658.14-2021》。
均質(zhì)后的牛奶樣品加入乙酸鈉溶液，渦旋混勻后調(diào)節(jié)pH，使用β-葡萄糖醛酸酶/芳香基硫酸酯酶溶液酶解，冷卻后加入乙腈和叔丁基甲醚，渦旋混勻，震蕩，離心，重復(fù)提取兩次。取上層液合并于50℃水浴氮吹干并用甲醇水溶解，加入正己烷震蕩離心提取兩次。取下層水相，氮吹，甲醇水溶解殘余物后，過HLB固相萃取柱，依次用不同配比的甲醇-氨水溶液和水淋洗，抽干，淋洗液過氨基固相萃取柱后洗脫。收集的洗脫液于50℃水浴氮吹干，用80%甲醇溶液溶解殘余物，超聲，渦旋，過濾。
線性和檢出限
圖1空白溶劑MRM疊加色譜圖
圖2 濃度為2ug/kg 2種群勃龍類化合物疊加色譜圖
表3 2種群勃龍類化合物檢出限和定量限
樣品測(cè)試
按照2.3中樣品制備方法處理牛奶樣品，平行測(cè)定3次，批處理結(jié)果如下圖所示，未發(fā)現(xiàn)牛奶有群勃龍類化合物殘留。
圖8牛奶樣品批處理結(jié)果圖
圖9 牛奶樣品MRM疊加色譜圖
結(jié)語
牛奶樣品經(jīng)HLB、氨基固相萃取柱等前處理過程，使用三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)對(duì)牛奶中2種群勃龍類化合物進(jìn)行測(cè)定。本文考察了方法的線性、精密度、靈敏度、回收率和實(shí)際樣品測(cè)試等，結(jié)果表明：2種群勃龍類化合物在檢測(cè)范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)均在0.995以上；對(duì)不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液各平行測(cè)定6次，方法精密度在5%以內(nèi)，儀器精密度良好。對(duì)于樣品加標(biāo)前處理后上機(jī)分析，加標(biāo)濃度30ug/kg時(shí)，α-群勃龍回收率為111.67%，β-群勃龍回收率為75.11%，回收率均處于60%~120%之間，符合標(biāo)準(zhǔn)。α-群勃龍檢出限為0.15ug/kg，測(cè)定下限為0.51 ug/kg；β-群勃龍檢出限為0.06ug/kg，測(cè)定下限為0.20 ug/kg；因此高靈敏、高抗污染能力的LCMS/MS系統(tǒng)，可用于牛奶樣品中群勃龍類化合物殘留含量進(jìn)行快速、靈敏、準(zhǔn)確的定量檢測(cè)。
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設(shè)備與耗材方案
一、EXPEC 5210 配置詳情
二、標(biāo)準(zhǔn)品
