群勃龍，常被作為動物生長促劑用于動物養(yǎng)殖。但群勃龍會以原形或中間代謝產(chǎn)物在動物的細(xì)胞、組織或器官中蓄積，造成殘留。一旦被人食用后，可產(chǎn)生一系列激素樣作用，如破壞人機(jī)體的激素平衡、干擾人的內(nèi)分泌功能、影響生育能力、并具有潛在致癌性、發(fā)育毒性。2020年，群勃龍已被列入食品動物中禁止使用的藥品及其他化合物清單。但因其很強(qiáng)的促蛋白合成作用，少數(shù)生產(chǎn)企業(yè)及飼養(yǎng)者、經(jīng)營者會在牛養(yǎng)殖過程中濫用或非法使用作為同化激素類添加劑的群勃龍以促進(jìn)牛的生長和牛奶生產(chǎn)，常常造成群勃龍在牛肉、牛奶等動物性源食品中殘留量超標(biāo)，危害人體健康。因此，對食品中群勃龍殘留的檢測至關(guān)重要。然而群勃龍殘留檢測樣品基質(zhì)復(fù)雜、干擾物質(zhì)多、濃度低，對方法的靈敏度、準(zhǔn)確度、特異性等要求極高。液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜優(yōu)秀的靈敏度、準(zhǔn)確度可以滿足檢測需求，能夠在高背景或干擾物存在的情況下完成對群勃龍定量檢測。因此，本文參考《GB 31658.14-2021 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 動物性食品中α-群勃龍和β-群勃龍殘留量的測定 液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法》，建立了測定牛奶中群勃龍類獸藥含量的快速且高靈敏度的檢測方法。

關(guān)鍵詞：LC-MS/MS、食品、牛奶、α-群勃龍、β-群勃龍、獸殘、GB 31658.14-2021

實(shí)驗(yàn)部分

儀器

表1 液相色譜串聯(lián)三重四級桿質(zhì)譜儀

表2 液相色譜串聯(lián)三重四級桿質(zhì)譜儀檢測參數(shù)

試劑及標(biāo)準(zhǔn)品

      試劑：質(zhì)譜級甲酸(CNW)、質(zhì)譜級乙酸銨（CNW）、色譜級甲醇（Merck）、色譜純叔丁基甲醚（CNW）、色譜純乙腈（Merck）；乙酸鈉、乙酸、氨水（國藥集團(tuán)）、β-葡萄糖醛酸酶/芳香基硫酸酯酶溶液（CNW）；

      純水：18.2 MΩ·cm去離子水（25℃）；

      標(biāo)準(zhǔn)品：α-群勃龍、β-群勃龍（壇墨質(zhì)檢）。 

樣品前處理

      樣品前處理方法：參考《GB 31658.14-2021》。

      均質(zhì)后的牛奶樣品加入乙酸鈉溶液，渦旋混勻后調(diào)節(jié)pH，使用β-葡萄糖醛酸酶/芳香基硫酸酯酶溶液酶解，冷卻后加入乙腈和叔丁基甲醚，渦旋混勻，震蕩，離心，重復(fù)提取兩次。取上層液合并于50℃水浴氮吹干并用甲醇水溶解，加入正己烷震蕩離心提取兩次。取下層水相，氮吹，甲醇水溶解殘余物后，過HLB固相萃取柱，依次用不同配比的甲醇-氨水溶液和水淋洗，抽干，淋洗液過氨基固相萃取柱后洗脫。收集的洗脫液于50℃水浴氮吹干，用80%甲醇溶液溶解殘余物，超聲，渦旋，過濾。

線性和檢出限

圖1空白溶劑MRM疊加色譜圖

圖2 濃度為2ug/kg 2種群勃龍類化合物疊加色譜圖

表3 2種群勃龍類化合物檢出限和定量限

樣品測試

      按照2.3中樣品制備方法處理牛奶樣品，平行測定3次，批處理結(jié)果如下圖所示，未發(fā)現(xiàn)牛奶有群勃龍類化合物殘留。

圖8牛奶樣品批處理結(jié)果圖

圖9 牛奶樣品MRM疊加色譜圖

結(jié)語

      牛奶樣品經(jīng)HLB、氨基固相萃取柱等前處理過程，使用三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)對牛奶中2種群勃龍類化合物進(jìn)行測定。本文考察了方法的線性、精密度、靈敏度、回收率和實(shí)際樣品測試等，結(jié)果表明：2種群勃龍類化合物在檢測范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)均在0.995以上；對不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液各平行測定6次，方法精密度在5%以內(nèi)，儀器精密度良好。對于樣品加標(biāo)前處理后上機(jī)分析，加標(biāo)濃度30ug/kg時，α-群勃龍回收率為111.67%，β-群勃龍回收率為75.11%，回收率均處于60%~120%之間，符合標(biāo)準(zhǔn)。α-群勃龍檢出限為0.15ug/kg，測定下限為0.51 ug/kg；β-群勃龍檢出限為0.06ug/kg，測定下限為0.20 ug/kg；因此高靈敏、高抗污染能力的LCMS/MS系統(tǒng)，可用于牛奶樣品中群勃龍類化合物殘留含量進(jìn)行快速、靈敏、準(zhǔn)確的定量檢測。

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• 附錄

設(shè)備與耗材方案

一、EXPEC 5210 配置詳情

二、標(biāo)準(zhǔn)品